在蛋白表達(dá)過(guò)程中出現(xiàn)失敗的情況是很正常的，有很多人天天泡論壇，天天做實(shí)驗(yàn)，但是蛋白表達(dá)的成功率依然不是很高，這是為什么呢?采用哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)來(lái)表達(dá)蛋白，能夠客服修飾蛋白表達(dá)的問(wèn)題，而且能夠?qū)崿F(xiàn)高度人源化，可用于結(jié)構(gòu)、功能分析等。

　　哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)最常用的兩個(gè)方式是瞬時(shí)表達(dá)和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染也就是我們常說(shuō)的穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建，表達(dá)原理就是將外源基因轉(zhuǎn)染到細(xì)胞染色體生，讓其可以長(zhǎng)期穩(wěn)定地生產(chǎn)蛋白。雖然說(shuō)生產(chǎn)的蛋白質(zhì)量高且設(shè)計(jì)性強(qiáng)，但是，價(jià)格相對(duì)較高，周期長(zhǎng)，操作難度也相對(duì)較大。所以，我們常用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染來(lái)進(jìn)行表達(dá)。

　　那么，如何提升瞬時(shí)表達(dá)的效率呢?

　　方法一：編碼優(yōu)化

　　根據(jù)應(yīng)用設(shè)計(jì)出最佳編碼序列，同時(shí)為其選擇最合適的表達(dá)載體，這樣，就能在極大程度上提升蛋白表達(dá)的成功率。也就是說(shuō)，我們?cè)陂_(kāi)始蛋白表達(dá)之前，使用密碼子優(yōu)化算法，計(jì)算出合適的編碼序列，這樣可以節(jié)約時(shí)間、精力和成本;

　　方法二：提升溶解液濃度

　　很多時(shí)候，我們用來(lái)溶解蛋白的溶液濃度相對(duì)較低，使得蛋白表達(dá)量低，所以，出現(xiàn)這種問(wèn)題的時(shí)候，我們可以考慮適當(dāng)提升一下溶解液的濃度;

　　方法三：搭配融合伴侶

　　我們可以適當(dāng)?shù)卦谥亟M蛋白中添加短肽序列，也就是我們常說(shuō)的蛋白標(biāo)簽。這種方法可以有效地提升蛋白的表達(dá)效率，而后再用酶切技術(shù)或者化學(xué)試劑去除掉標(biāo)簽;

　　方法四：純化優(yōu)化

　　根據(jù)上下游蛋白需求和純度的不同，設(shè)計(jì)出不同的純化方法。比如蛋白表達(dá)量高，就可以考慮使用一步式親和純化。如果需要進(jìn)一步地純化，則可以進(jìn)行分子排阻色譜，如果在這個(gè)基礎(chǔ)上需要繼續(xù)純化的話，則可以考慮使用更高的純化方式;

　　總的來(lái)說(shuō)，通過(guò)如上的四種方法可以在極大程度上提升蛋白表達(dá)的效率及成功率，當(dāng)然了，在日常實(shí)驗(yàn)中，需要結(jié)合實(shí)際情況來(lái)選擇合適的方法。同時(shí)，我們?cè)谧鰧?shí)驗(yàn)的時(shí)候，需要多注意一些細(xì)節(jié)方面的問(wèn)題，比如溫度控制、PH值等等，這些細(xì)節(jié)都做好了，就能夠在更大程度上保障實(shí)驗(yàn)的成功率。更多蛋白表達(dá)的知識(shí)，敬請(qǐng)關(guān)注普健生物。