對于重組蛋白表達來說,我們常常會在實驗過程中遇到這樣或那樣的問題,最終導(dǎo)致蛋白表達的效果達不到我們的預(yù)期。雖然我們通過哺乳動物表達系統(tǒng)克服了原核翻譯后修飾表達的問題,而且通過瞬時表達和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染等一系列的方法有效地提升了表達率,但是也因為成本高、操作難度大,不適合小型公司的使用。
那么,有沒有什么辦法可以提升小規(guī)模重組蛋白表達效率呢?答案是肯定的。
方法一:序列優(yōu)化
根據(jù)使用需求,設(shè)計最佳的編碼序列用于表達蛋白??偟膩碚f,就是在開始蛋白表達之前,我們就通過密碼子優(yōu)化算法以及一些表達載體選擇,為表達提供優(yōu)質(zhì)的環(huán)境,這樣能在極大程度上提升蛋白表達的效率;
方法二:提升蛋白溶解度
因為溶解度低的問題,也會導(dǎo)致蛋白表達的效率降低。因此,我們可以通過溫度調(diào)控、培養(yǎng)基選擇、加入一些添加劑等方法來提升蛋白溶解度,以便于提升蛋白的表達效率;
方法三:輔助融合劑使用
比如蛋白標(biāo)簽的使用。我們知道,當(dāng)我們將標(biāo)簽蛋白插入到重組蛋白表達序列上時,蛋白的表達效率就能夠得到有效的提升,而后再通過酶切或添加化學(xué)試劑的方式切除的方式去除。當(dāng)然了,在選擇之前,我們需要針對特定的表達系統(tǒng)選擇合適的標(biāo)簽,這個需要結(jié)合多種因素進行考慮;
方法四:純化方法優(yōu)化
針對下游的使用需求和純度需求來設(shè)計不同的純化方法。一般來說,對于蛋白表達量高的可以考慮一步式親和純化,如果需要進一步純化,可使用親和純化后分子排阻色譜進行。當(dāng)然了,在不同情況下,也可以考慮使用離子交互色譜;
通過如上的方法,再結(jié)合自己的需求來設(shè)計,這樣就能在一定程度上提升蛋白的表現(xiàn)率。當(dāng)然了,針對不同的情況,還可以適當(dāng)?shù)脑黾右恍┢渌椒?,畢竟不同的使用環(huán)境下,方法也是各不相同的。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供重組蛋白表達服務(wù),如果您有相關(guān)需求,歡迎來電咨詢。