20世紀90年代末期，抗體技術在腫瘤領域廣泛應用，尤其是針對惡性腫瘤細胞特異性抗體的應用。免疫療法在癌癥中取得了突破性進展，相較傳統(tǒng)化療和靶向治療，免疫治療可通過激活患者免疫系統(tǒng)來識別和對抗腫瘤細胞。雙特異性抗體能夠招募免疫細胞參與隨后殺死腫瘤細胞，被廣泛應用于腫瘤的免疫治療。
表  抗腫瘤雙特異性納米抗體Anti-tumorbispecificnanobodies

CAR-T細胞
CAR-T細胞(chimeric antigen receptors-modified T cells)療法是一種通過基因修飾使T細胞表達腫瘤特異性嵌合抗原受體的一種新型腫瘤免疫療法。CAR結構通常由抗體單鏈可變片段scFv與細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導結構域連接而成，經(jīng)CAR修飾后的T細胞能夠識別腫瘤細胞的特異性抗原，并起到殺傷腫瘤細胞的作用。但單鏈抗體在CARs中表現(xiàn)出一定程度的寡聚化，導致強直信號轉(zhuǎn)導、T細胞衰竭和體內(nèi)表現(xiàn)不佳。此外，CAR-T細胞治療雖對B細胞惡性腫瘤具有顯著的臨床療效，但針對其他實體腫瘤和抗原的療效仍有不足。因此，為克服目前CAR-T細胞治療的困難與局限，研究者們致力尋找能夠替代單鏈抗體的其他抗原結合域，其中納米抗體和雙特異性納米抗體是較為理想的選擇。

目前，以納米抗體作為CAR細胞外抗原識別結構域的研究主要靶向CD19、CD20、CD30和CD22，其中以CD19和CD3組合的研究最為廣泛。CD20是一類重要的B細胞表達分化的抗原，在Ca2+通道中參與調(diào)控細胞周期進程。CD47在腫瘤細胞免疫抵抗和逃逸中起重要作用。CD22是一種唾液酸結合性免疫球蛋白，趙振東等構建靶向CD22的嵌合抗原受體，彌補了scFv在分子量、分子表達和功能發(fā)揮上的缺陷。

免疫檢查點
免疫檢查點可調(diào)節(jié)人體免疫以避免正常的組織損傷。CTLA-4和PD-1的抗體藥物分別獲批并投入使用，開啟了靶向免疫檢查點治療抗體藥物時代。PD1與其配體PDL1的結合限制了T細胞的活性，從而防止了過度刺激，維持了對自身抗原的免疫耐受。

阻斷PD-1/PD-L1信號通路可使癌細胞死亡，但該療法存在缺陷，大部分患者無明顯療效。目前，通過免疫駱駝篩選獲得靶向PD-L1和CTLA-4的納米抗體KN035和KN044，從而構建能夠同時結合PD-L1和CTLA-4的雙特異性納米抗體。

補體系統(tǒng)介導的腫瘤免疫
補體系統(tǒng)能夠清除病原體和受損的宿主細胞。然而，只有部分治療性抗體能夠誘導補體依賴性細胞毒性，需要尋找增強補體激活的新策略。補體系統(tǒng)與腫瘤的免疫逃逸密切相關，主要包括補體固有成分C3分子和C1q，補體活化產(chǎn)物C3a和C5a，及補體調(diào)節(jié)蛋白H因子和mCRPs。

靶向腫瘤的治療性抗體
腫瘤靶向治療需識別腫瘤細胞與常規(guī)細胞的不同，設計適合的分子藥物，能否特異性靶向腫瘤細胞是其關鍵，因此靶區(qū)域的準確定位是關鍵。雙特異性納米抗體的分子量小、穿透性強的特點，為癌癥靶向治療提供了新的研究思路。

人類表皮生長因子受體2(human epidermal growth factor receptor-2, HER2)是一種酪氨酸激酶受體，在乳腺癌中過表達。目前，HER2靶向治療是對HER2陽性腫瘤的一個重要治療手段。有研究學者對HER2上不同表位的單特異性VHH和雙特異性VHH進行比較，表明雙特異性VHH具有更高的親和力，并設計出靶向HER2并經(jīng)人源化改造的雙表位納米抗體，并通過細胞殺傷性試驗，證明了該抗體對HER2陽性細胞具有良好的殺傷效果。


參考文獻
YUAN Bo,WANG Jie-wen,KANG Guang-bo,HUANG He. Research Progress and Application of Bispecific Nanobody. China Biotechnology, 2021, 41(2/3): 78-88.