關(guān)于重組蛋白，相信一些有一點(diǎn)技術(shù)的公司都可以做表達(dá)出來(lái)，但是，如果想要將蛋白用于下游實(shí)驗(yàn)，那么，成功表達(dá)的重組蛋白就顯得非常的重要了。蛋白并不是說(shuō)表達(dá)出來(lái)就行，而是需要為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)提供有效助力，如果在一開(kāi)始的時(shí)候就優(yōu)化了蛋白的可溶性，那么，后續(xù)的實(shí)驗(yàn)將會(huì)得到極大的簡(jiǎn)化。因此，為重組蛋白選擇一款正確的標(biāo)簽就顯得非常重要了。

　　常用的標(biāo)簽中都有什么?

　　很多人對(duì)于“正確”這個(gè)詞有著一定的誤解，只是覺(jué)得挑選一個(gè)標(biāo)簽讓蛋白得以表達(dá)即可。其實(shí)不然，所選的標(biāo)簽需要幫助我們獲得可溶性蛋白，不僅簡(jiǎn)化相應(yīng)的蛋白純化方案，更是不會(huì)對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生影響，甚至起到促進(jìn)作用。所以，對(duì)于那些具備多個(gè)切割位點(diǎn)的蛋白來(lái)說(shuō)，我們需要考慮的問(wèn)題就是蛋白的溶解、表達(dá)以及純化點(diǎn)是否可以切除，以及切除這個(gè)點(diǎn)是否會(huì)影響到后續(xù)目的蛋白的行為。

　　如何獲得可溶性蛋白?

　　對(duì)于重組蛋白來(lái)說(shuō)，它在真核細(xì)菌中表達(dá)時(shí)，最常見(jiàn)的問(wèn)題就是不溶。所以，想要使得其可溶性提升，需要結(jié)合如下三個(gè)方面來(lái)進(jìn)行考慮。

　　1、IPTG濃度

　　簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，就是控制好IPTG的濃度，可以嘗試多幾個(gè)不同的濃度，選擇一下，看哪個(gè)濃度能夠提供最高的可溶性蛋白濃度;

　　2、溫度

　　首先，我們選擇37度的典型溫度來(lái)進(jìn)行生長(zhǎng)和誘導(dǎo)分離，一般來(lái)說(shuō)，在更低的溫度下蛋白的表達(dá)程度更高。然后，我們可以分別嘗試在30度、25度、18度等條件下進(jìn)行誘導(dǎo)，選擇最佳誘導(dǎo)溫度后，再加入IPTG;

　　3、誘導(dǎo)時(shí)間

　　當(dāng)然了，誘導(dǎo)的時(shí)間并非越長(zhǎng)越好，對(duì)于那些“有毒蛋白”顯得尤為明顯。一般來(lái)說(shuō)，我們?cè)谡T導(dǎo)時(shí)，選擇隔幾個(gè)小時(shí)取一次樣，并檢查目的蛋白的表達(dá)量;

　　當(dāng)然了，如果通過(guò)如上這些手段都沒(méi)有達(dá)到我們的要求，那么，我們可以考慮通過(guò)只表達(dá)蛋白的一部分，或者選擇不同的表達(dá)系統(tǒng)來(lái)進(jìn)行表達(dá)，甚至保留目的蛋白的翻譯后修飾?？偟膩?lái)說(shuō)，通過(guò)多次的實(shí)驗(yàn)總會(huì)獲得我們所需的重組蛋白。武漢普健生物專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供重組蛋白表達(dá)服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。