在“重組蛋白之蛋白純化的原理與步驟”一文中,我們和大家詳細介紹了蛋白純化的相關(guān)原理和具體步驟,相信大家對蛋白純化也有了初步的了解。那么,有關(guān)重組蛋白純化的方法您了解多少呢?今天,普健生物就在這里和大家具體聊聊。
我們知道,不同的蛋白在物理、化學(xué)、生物活性等方面都有著極大的不同,因為其氨基酸序列和數(shù)量的不同,連接氨基酸殘基可能是荷正電也可能是荷負電的、極性或是非極性的、親水或是疏水的。所以,我們完全可以根據(jù)它們的這些特點來對其進行相關(guān)純化工作。
方法一:超速離心法
超速離心法主要用于分離亞細胞和蛋白,利用個例子在梯度液中沉降速度不同的原理,使得不同沉降速度的顆粒處于不同密度的梯度層中,從而達到分離的目的;
方法二:選擇性沉淀法
選擇性沉淀法其實就是利用各種沉淀劑或者通過改變某些條件來促使分層沉淀,進而實現(xiàn)蛋白的純化。
常用的方法有鹽析沉淀法、有機溶劑沉淀法、水溶性非離子型聚合物沉淀法等方法來實現(xiàn)蛋白純化操作,具體方式及其優(yōu)劣我們將在后文中和大家詳細介紹;
方法三:凝膠層析法
凝膠層析法也被稱為分子篩過濾法,其實就是利用分子大小的不同,將蛋白分離出來。相比其他方法來說,凝膠沉淀法操作相對溫和,對蛋白造成的影響相對要小一些;
方法四:離子交換層析法
離子交換層析法是利用分子所含電荷的吸附作用不同來實現(xiàn)。我們和大家提到過,蛋白的等電點不同,其所帶電荷量也是各不相同的,所以,通過在纖維素上加入電荷位置,從而實現(xiàn)吸附蛋白的效果;
方法五:親和層析法
親和層析法其實就是利用生物大分子的特異性,類似親和力結(jié)合的方式來實現(xiàn)蛋白的吸附;
總的來說,上面五種方法所針對的方面不同,其實也是針對各類蛋白在大小、特性等方面的不同來實現(xiàn)蛋白的純化操作。對于不同的純化需求來說,五種方法可謂各具優(yōu)勢,需要有選擇地進行選擇。武漢普健生物專業(yè)為廣大用戶提供重組蛋白純化服務(wù),如果您有相關(guān)需求,歡迎來電咨詢。